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高效液相色谱法测定田七药材中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1含量

来源:   编辑:   时间:2012-07-27  

    目的:采用HPLC方法测定三七药材中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量。方法:色谱条件,以KromasilC18柱(4.6mm×250mm,5um)为色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸(25:75)为流动相,检测波长203nm;流速1.5mL/min。结果人参皂苷R1在O.52~10.36ug内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.99992,n=7),三七皂苷R1在O.2O~4.05ug内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.99998,n=7)。人参皂苷Rgl的回收率为97.4%~98.9%(n=9),三七皂苷Rl的回收率为93.6%~96.O%(n=9)。结论本方法分离度好,快速,简便,重现性好,可用于三七药材的质量控制。

    中药三七为五加科植物三七的干燥根,是我国传统名贵中药。具有散瘀止血,消肿定痛等多种功效。近年来三七的药理研究已取得显著进展,其中三七总皂苷具有耐缺氧、降血糖血脂、改善微循环、增强机体免疫力、抗炎、抗衰老等多方面的生理活性。三七总皂苷主要含人参皂苷Rbl、人参皂苷Rgl和三七皂苷R1三种主要活性成分。目前三七药材中各组分的含量测定方法已有一些报道。《中国药典》一部(2000年版)系应用薄层扫描法对三七中所含的人参皂苷Rbl和人参皂苷Rg1进行定量控制。本实验研究采用HPLC法测定三七药材中人参皂苷Rgl和三七皂苷R1的含量。结果表明本法简便,快速,重现性好。

   1、仪器与试药

    LC-6A高效液相色谱仪,SPD-6AV紫外检测器,C-R4A数据处理机(日本岛津公司)。
    三七药材Panaxnotoginseng(Burk)F.H.Chen,购于云南玉溪万方药厂,产地云南红河州;人参皂苷Rgl,三七皂苷R.对照品(供含量测定用)均购自中国药品生物制品检定所;乙腈:FisherScientific公司,HPLC级;磷酸为分析纯。
   

    2、方法与结果
   

    色谱柱:KromasilCl8柱(4.6mm×250mm,5um);流动相:乙腈-0.05%磷酸(25:75);检测波长203nm;流速1.5mL/min;柱温40℃。柱效以人参皂苷Rgl计,理论塔板数应不低于2500。
    精密称取三七药材粉末(过三号筛)约1.5g,置500mL烧瓶中,加乙醚100mL,置水浴上加热回流1h。弃去乙醚并挥干,粉末加甲醇80mL,加热回流2次,每次lh。过滤,合井滤液,减压浓缩至干。残留物分次加水使溶解,置50mL量瓶中,加水至刻度,微孔滤膜(0.45μm)滤过。精密吸取5mL,置25mL量瓶中,加水至刻度,备用。分别精密称取60℃真空干燥2h的人参皂苷Rgl和三七皂苷R.对照品约25mg和10mg于50mL量瓶中,加水溶解并定容,作为对照品储备液。精密吸取对照品储备液0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0mL于10mL量瓶中,用水定容至刻度,摇匀,微孔滤膜(0.45um)滤过。取续滤液20μL进样,记录色谱图,分别以峰面积对进样量回归分析,得到人参皂苷
    Rgl和三七皂苷R1的线性回归方程分别为:
Y=6.327×0.000001X一0.08553.r=0.99992
Y=7.971×0.000001X一0.00803.r=0.99998
进样量范围分别为0.52~10.36ug和0.20~4.051ug。
   

    稳定性试验
精密吸取供试品溶液l0uL分别于0,l,2,3,4h进样,记录峰面积,结果人参皂苷RglRSD=0.93%(n=5),三七皂苷R1RSD=1.22%(n=5)。

    精密度试验
精密吸取供试品溶液l0uL进样,记录峰面积,连续5次。人参皂苷RglRSD=0.54%,三七皂苷R1RSD=0.38%。

    重复性试验
用同一规格的三七药材按2.2法提取制备5份供试品溶液。精密吸取供试品溶液1OuL进样,记录峰面积。人参皂苷RglRSD=1.44%,三七皂苷R1RSD=1.68%。

    回收率测定
    取已知含量的样品粉末(过三号筛)约1.0g,精密称定9份,分别精密加入一定量的人参皂苷Rg1和三七皂苷R1对照品.按2.2法制备,进样1OuL,记录峰面积并计算回收率。
   

    样品测定
    取6批样品,按2.2法操作,在上述色谱条件下,以外标法计算各样品中人参皂苷Rgl和三七皂苷R1的含量,同时以TLC法做比较。
   

    3、讨论

     先后用了不同比例的流动相,经实验,认为用乙腈-0.05%磷酸(25:75)为测定人参皂苷Rgl和三七皂苷R1含量的流动相,即可排除干扰,又能使各组分达到基线分离的效果。且分析时间较短。
   

    对比实验
   与中国药典一部2000年版所述的薄层扫描法相比,本方法操作简便,精密度高,重现性好。对6个样品中人参皂苷Rg1的测定结果基本一致,而对三七皂苷R1的分析结果差距较大。薄层法结果偏高,高效液相法偏低,考虑这与薄层法误差较大有关

昌信科学仪器公司