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關於色譜柱的幾個問答

來源:昌信科學儀器公司; 編輯:   時間:2018-05-01  

關於色譜柱的幾個問答

1、網上對色譜柱是否可以反沖一直有爭論,那什麼樣的柱子可以反沖,什麼不可以。反沖後是正者用,還是反著用。具體到各型號柱子不僅是ODS柱,其他如正向柱、氨基柱、離子交換柱等最好都有解釋。

答:一般的正相反相柱應該都能反沖,只有兩端篩板孔徑不對稱的柱子不能反沖,不過目前這樣的柱子已經比較少見了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉,反沖後還是正著用比較好,以免色譜柱的兩頭都被污染。我們一直提倡的是:正向使用,反向沖洗。

2、在做方法開發的時候,用乙腈和水作為流動相,在調整梯度的時候發現,剛開始用60%乙腈, RT為2.5分鐘,調到40%乙腈,RT沒有變化,30%也沒有變化,一直調到20%的時候,RT突然變到了約13分鐘,請問這是什麼原因?我用的是離子色譜柱。

答:離子色譜柱的保留時間主要由洗脫液的離子強度和pH決定,你現在講的比較簡單,需要把你的方法說的詳細一點才能做具體的分析。譬如分析物是什麼情況,其含有極性電離基團和非極性基團是什麼性質?離子交換柱是聚合物基質還是矽膠基質?水相是什麼緩衝鹽?

3、對於一根常用的c18柱,拿到一根新色譜柱的時候應該怎樣進行活化及維護?為什麼要這樣做?

答:新色譜柱活化,實際上是一個平衡的過程,除了用流動相平衡外,有時候還必須用所測樣品對新柱進行平衡,特別是測定分子量比較高的多肽,尤其重要。因為分子量高的物質分子,擴散速度慢,平衡所需時間也相應較長。具體平衡方式也很簡單,多進幾次樣品,直到峰面積和保留時間穩定,再進行正式進樣測定。

如果要加快平衡時間,把前面用來平衡的進樣樣品濃度加大,或者不等洗脫完成,連續進樣多針。用待測物對新柱平衡,目的是將矽膠基質填料表面具有非特異性吸附的位點的吸附能力飽和掉。

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