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常用液相色譜柱使用方法與維護保養 ( 二 )

來源:香港昌信科學儀器公司; 編輯:   時間:2018-05-20  

上期我們我們介紹常用液相色譜柱的一些相關基礎知識概念,今天香港昌信分析儀器公司的小編就為大家介紹一下反相色譜柱(Reversed-phase chromatography column)的一些使用方法和維護保養知識。


(1)準備新鮮超純水及色譜級乙腈或甲醇,沖洗色譜儀器系統,保證儀器系統管路乾淨。(新柱老化前,此步決不可忽略)


(2)將色譜柱反向連接,不接檢測器。用水-有機相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速沖洗20~30min。(目的是沖洗出柱入口端無機雜物與篩板孔雜物,使篩板正常)


(3)再將色譜柱正向連接,不接檢測器。用水-有機相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速沖洗20~30min。(目的是沖洗出柱出口端無機雜物與篩板孔雜物,使篩板正常)


(4)連接檢測器,開啟柱溫達30℃~40℃,用水-有機相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速沖洗4h以上。(目的是充飽和色譜柱,去除柱內空氣)


(5)用水-有機相(10:90~5:95),以0.3~0.6ml/min流速沖洗2h以上[或在120min內以水-有機相(95:5→0:100)梯度變化,以0.3~0.6ml/min流速沖洗]→再用100%有機溶劑,以0.3~0.6ml/min流速沖洗1h以上→最後用100%有機溶劑,以1ml/min流速沖洗1h以上。(目的是老化色譜柱)


(6)在平衡前根據水相-有機相的比例,首先調整水-有機相的比例接近流動相水相-有機相的比例,以1ml/min流速沖洗30左右(目的是相平衡過渡)。如果流動相中含有緩衝鹽,決不可在柱老化後立即用流動相平衡,必需先用90%以上水進行預平衡30min以上,否則,會導致緩衝鹽在柱內析出結晶,嚴重時會將新柱永久不可逆地損壞。


(7)然後更換成新制並經0.45um濾膜過濾,超聲脫氣後的流動相,按檢測方法平衡至少1h,待基線穩定後,開始進樣檢測。


(8)由於是新柱首次使用,在進樣完成後需立即對色譜柱進行淨化和有機溶劑飽和。方法是:用水-有機相(90:10~95:5),以0.6ml/min流速沖洗1h以上→再用水-有機相(90:10~95:5),以1ml/min流速沖洗30min以上(或者採用溶劑梯度變化至100%有機相沖洗120min以上)→最後用100%有機溶劑,以1ml/min流速沖洗1h以上。若流動相中有緩衝鹽,建議用100%水沖洗1h以上後,再重複上述淨化程式(但個別品牌C8或C18色譜柱不耐受純水沖洗者例外)。      在新色譜柱使用幾次,均正常後,運行完畢淨化處理程式可簡化為:用水-有機相(90:10~95:5),以1ml/min流速沖洗1h以上→再用100%有機溶劑,以1ml/min流速沖洗30min以上→選擇柱說明書中保存條件(Storage Conditions)規定的保存溶劑(Storage Solvent)沖洗10倍柱體積以上→封口,保存。


(9)淨化完畢,若次日不再使用,可取下色譜柱,用封頭螺絲密封,交色譜柱管理人員入庫保存於防塵環境下,備案。


10)備註:老化用有機溶劑推薦使用色譜級甲醇,不同品牌色譜柱需區別對待;水需用去離子的超純水。若色譜柱使用後入庫保存,長時間未使用,重新使用時仍需重新飽和。方法是:用水-有機相(90:10~95:5),以0.6ml/min流速沖洗1h以上→再用100%有機溶劑,以1ml/min流速沖洗30min以上→然後調整水-有機相的比例接近流動相水相-有機相的比例,以1ml/min流速沖洗30左右→最後用流動相平衡1h以上,進樣檢測。必需注意流動相pH值不能超過色譜柱pH耐受範圍,過酸容易使鍵合相變態,過堿則易導致矽膠溶解柱床塌陷。


(11)特別提示:當供試品溶液中含有一定量表面活性劑,多次進樣後,由於表面活性劑會在篩板及矽膠表面形成表面膜,導致峰變寬、拖尾甚至分叉。此時,處理方法如下:將色譜柱反向連接接,不接檢測器,用水-乙腈(90:10~95:5),以0.6ml/min流速沖洗2h以上→再用100%乙腈,以0.6ml/min流速沖洗1h以上→然後正向連接好色譜柱,用水-乙腈(90:10~95:5),以1ml/min流速沖洗1h以上→再用100%乙腈,以1ml/min流速沖洗1h以上,即可恢復。


(12)警告:無論何時,必須保證色譜柱柱床不乾涸,尤其是進樣檢測和柱沖洗過程中不能讓流動相長時間(30min以上)走空,否則易使色譜柱乾涸且帶入大量幾乎無法排出的氣泡,甚至導致柱床局部塌陷或中部開裂。使用與保存時,嚴禁用力甩,絕對杜絕不小心猛烈撞擊或高處掉落,否則,易導致柱床機械性損壞,則再無再生可能。


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