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正相色譜柱使用方法介紹

來源:香港昌信科學儀器公司; 編輯:   時間:2018-05-24  

目前,正相色譜分析最常用的是氨基柱(-NH2)與氰基柱。今天我們先來講解一下氨基柱(正向色譜柱)的使用方法。

氨基柱可以同時用於正相條件和反相條件,但多用於正相色譜條件。使用時需注意,正相反相交替使用時必需用異丙醇過度,保證柱保存溶劑與流動相互溶。新購氨基柱老化處理及使用基本程式如下:

1)若需要在正相條件下使用:

①用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速沖洗約50倍柱體積[備註:氨基柱出廠保存溶劑多用正相溶劑,eg.正己烷-乙腈(99:1)]。 

②再根據待分析用正相流動相極性選用極性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速沖洗約10倍柱體積。

③用正相流動相平衡1h以上,確保柱壓控制在6000Psi以內,以防止柱頭塌陷。待基線平穩後,進樣檢測。如果要使用的流動相中含有緩衝鹽類,在使用流動相平衡之前,先用不含緩衝鹽的同比例流動相過渡,沖洗約10倍柱體積,避免緩衝鹽在分析柱內析出。

④分析完畢,用異丙醇,以0.5ml/min流速沖洗色譜柱約30倍柱體積→再用甲醇,以1ml/min流速沖洗色譜柱約10倍柱體積→再用異丙醇,以0.5ml/min流速沖洗色譜柱約10倍柱體積。若使用的分析用流動相中含有緩衝鹽類,分析完畢需先用不含緩衝鹽的同比例流動相沖洗約30倍柱體積,再按上述方法沖洗。

⑤再用色譜柱說明書中規定的正相保存溶劑以1ml/min沖洗約10倍柱體積,保存即可,一般用正己烷-乙腈(99:1)。

⑥重新在正相條件下使用時,重複上述①~⑤過程即可,時間可適當減少一半左右。

2)若需要在反相條件下使用:

①先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速沖洗約30倍柱體積

→再依次以0.5ml/min的流速,用等量的氯仿→異丙醇→甲醇→甲醇-水(50:50)分別沖洗柱子約10倍柱體積→再以0.5ml/min的流速,用pH11.0以下的氫氧化鈉溶液沖洗柱子約30倍柱體積(注意:pH值切不可超過11.0)→立即用水以0.5ml/min的流速沖洗柱子約30倍柱體積→最後換成反相流動相平衡1h以上,待基線平穩,進樣檢測。(備註:若要使用的反相流動相中含有緩衝鹽類,在用反相流動相平衡之前,先用不含緩衝鹽的同比例流動相過渡,沖洗約10倍柱體積,避免緩衝鹽在分析柱內析出。在反相條件下使用時,要特別注意控制pH值範圍及流動相中水的比例,pH值越低越易發生鍵合相水解,流動相中水的比例越高也越易發生鍵合相水解。最理想的pH範圍在pH 3.0-7.0,決不允許超過11.0。)

②反相條件下使用完畢,淨化處理程式同C18柱,但需注意,沖洗溶劑中有機相不能低於10%;淨化完畢,先用甲醇以0.5ml/min的流速沖洗柱子約10倍柱體積→然後用異丙醇以0.5ml/min的流速沖洗柱子約10倍柱體積→最後用色譜柱說明書中規定的正相保存溶劑[一般用正己烷-乙腈(99:1)]以1ml/min沖洗約10倍柱體積→密封,保存即可。

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