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正相色譜柱使用方法介紹(二)

來源:香港昌信科學儀器公司; 編輯:   時間:2018-05-27  

目前,正相色譜分析最常用的是氨基柱(-NH2)與氰基柱(-CN)。今天我們先來講解一下氰基柱(正向色譜柱)的使用方法。

氰基柱可以同時用於正相條件和反相條件,但多用於正相色譜條件。使用時需注意,正相反相交替使用時必需用異丙醇過度,保證柱保存溶劑與流動相互溶。新購氰基柱老化處理及使用基本程式與氨基柱基本相同,主要程式如下:

正相色譜柱使用方法介紹(二)

1)若需要在正相條件下使用:

①用異丙醇或正己烷以0.5ml/min的流速沖洗約30倍柱體積。(備註:氰基柱出廠保存溶劑多用正相溶劑,eg.正己烷或異丙醇。)

②再根據待分析用正相流動相極性選用極性相近的氯仿、異丙醇或二氯甲烷以相同的流速沖洗約10倍柱體積。

③用正相流動相平衡1h以上,確保柱壓控制在6000Psi以內,以防止柱頭塌陷。待基線平穩後,進樣檢測。如果要使用的流動相中含有緩衝鹽類,在使用流動相平衡之前,先用不含緩衝鹽的同比例流動相過渡,沖洗約10倍柱體積,避免緩衝鹽在分析柱內析出。

④分析完畢,用異丙醇,以0.5ml/min流速沖洗色譜柱約30倍柱體積

→再用甲醇,以1ml/min流速沖洗色譜柱約10倍柱體積→再用異丙醇,以0.5ml/min流速沖洗色譜柱約10倍柱體積。若使用的分析用流動相中含有緩衝鹽類,分析完畢需先用不含緩衝鹽的同比例流動相沖洗約30倍柱體積,再按上述方法沖洗。

⑤再用色譜柱說明書中規定的正相保存溶劑以0.5ml/min沖洗約10倍柱體積,保存即可,一般用正己烷或異丙醇。

⑥重新在正相條件下使用時,重複上述①~⑤過程即可,時間可適當減少一半左右。

2)若需要在反相條件下使用:

操作和維護與C18柱基本相同,但需注意,沖洗溶劑中有機相不能低於10%。

①新柱先用正己烷或異丙醇以0.5ml/min的流速沖洗約30倍柱體積→再依次以0.5ml/min的流速,用等量的水-乙腈(95:5)→THF(四氫呋喃)→水-乙腈(5:95)分別沖洗柱子約10倍柱體積[最好再繼續用水-乙腈(5:95)以0.2-0.3mL/min過夜沖洗]→最後換成反相流動相平衡1h以上,待基線平穩,進樣檢測。(備註:若要使用的反相流動相中含有緩衝鹽類,在用反相流動相平衡之前,先用不含緩衝鹽的同比例流動相過渡,沖洗約10倍柱體積,避免緩衝鹽在分析柱內析出。在反相條件下使用時,要特別注意控制pH值範圍及流動相中水的比例,pH值越低越易發生鍵合相水解,流動相中水的比例越高也越易發生鍵合相水解。最理想的pH範圍在pH 1.5-7.0。)

②反相條件下使用完畢,淨化處理程式同C18柱;淨化完畢,先用甲醇以0.5ml/min的流速沖洗柱子約10倍柱體積→然後用異丙醇以0.5ml/min的流速沖洗柱子約10倍柱體積→最後用色譜柱說明書中規定的正相保存溶劑(一般用正己烷或異丙醇)以0.5ml/min沖洗約10倍柱體積→密封,保存即可。

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